南京林业大学学报(自然科学版)

作者：宋子琪,卞国良,林峰,胡凤荣,尚旭岚

单位：1.南京林业大学南方现代林业协同创新中心,南京林业大学林草学院,江苏 南京 210037,2.中国科学院南京土壤研究所,江苏 南京 210018,3.南京林业大学现代分析测试中心,江苏 南京 210037,4.南京林业大学风景园林学院,江苏 南京 210037

关键词：青钱柳,倍性鉴定,流式细胞术,细胞核裂解液,内标法

基金：国家自然科学基金项目(31971642),国家自然科学基金项目(32271959),江苏省重点研发计划(现代农业)重点项目(BE2019388)

【目的】 利用流式细胞仪检测青钱柳(Cyclocarya paliurus)的染色体倍性,为青钱柳种质鉴定及遗传育种研究提供技术支持和基础数据。【方法】 以青钱柳叶片为材料,比较了裂解液种类、离心处理和叶片保存方式对倍性检测效果的影响。建立的青钱柳流式细胞分析倍性的方法为:取参照样本和待测样本叶片各0.50~1.00 cm2,加入1 mL的mGb裂解液中快速切碎,过滤后加入20 μL的碘化丙啶(PI)染色1 min即可上机检测。利用建立的方法对1 395份青钱柳种质资源的倍性进行检测。【结果】 mGb裂解液的裂解效果最好,峰图质量最优。细胞核悬浮液过滤后可无需离心而直接染色并进行测定。4 ℃冷藏叶片的测定效果最佳,保存时间以7 d为宜。硅胶干燥样本测定效果优于冷冻,硅胶干燥保存时间以150 d为宜。100份试验样本的DNA含量峰值的变异系数(CV)值为2.13%~5.04%,倍性估算值为1.80~2.40的样本判断为二倍体,倍性估算值为3.60~4.20的样本判断为四倍体。倍性估算值为3.00±0.40时,需采用与初判倍性相同的参照样本进行第2次标定。对1 395份青钱柳种质资源进行倍性鉴定,共检测出二倍体104份,四倍体1 291份。【结论】bbbb对于倍性估算值异常的样本,采用二次标定法可快速确定其倍性。该方法操作简单,高效准确,为青钱柳种质倍性鉴定提供了有效方法。

来源：2024年第2期

《南京林业大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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