南京林业大学学报(自然科学版)

作者：贺欣,徐秀月,亢溢敏,杨玲

单位：<sup class=\mag-xml-aff-label-sup added-by-sys\>1</sup> 林木遗传育种全国重点实验室, 东北林业大学, 黑龙江 哈尔滨 150040,<sup class=\mag-xml-aff-label-sup added-by-sys\>2</sup> 北京林业大学林学院, 北京 100091

关键词：红松,瞬时转化,体胚发生,分子育种

基金：国家重点研发计划(2023YFD2200103)

【目的】 优化根癌农杆菌介导的红松(Pinus koraiensis)胚性愈伤组织瞬时转化体系。【方法】以增殖培育10 d的红松胚性愈伤组织为受体材料,利用携带RUBY的pCambia1300载体进行瞬时转化,根据RUBY的表达量筛选最佳侵染液浓度、侵染时间、共培养时间和恢复培养时间。将promoterPkDof5.6-EGFP、promoterPkSHR-RUBY、35S-PkDof5.6-EGFP、35S-PkSHR-EGFP、35S-PkSHR-RUBY载体分别转染红松胚性愈伤组织,验证瞬时转化体系的条件。【结果】瞬时转化后,RUBY表达显著。当侵染菌液浓度(以A600表征)达到0.4、侵染10 min、共培养1 d,无恢复培养期时,RUBY片段的拷贝数最高。基因和启动子验证瞬时转化的定量及半定量结果表示,该条件可以实现红松胚性愈伤组织的高效转化。【结论】本研究成功建立了一种简单、快速、高效、低成本的根癌农杆菌介导的红松胚性愈伤组织瞬时转化体系,并优化了该体系的主要因素,得到最佳的转化条件为:侵染菌液浓度(A600)为0.4,侵染10 min,共培养1 d,无恢复培养期。该体系对红松体胚发生机理的大规模基因功能分析具有重要意义,并可为红松良种选育及规模化扩繁提供参考。

来源：2026年第1期

《南京林业大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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