南京林业大学学报(自然科学版)

作者：郭燕萌,胡德春,张树林,尤扬,朱高浦,田丽,周瑞金,董文怡,张蒙蒙

单位：<sup class=\mag-xml-aff-label-sup added-by-sys\>1</sup> 河南科技学院园艺园林学院, 河南 新乡 453003,<sup class=\mag-xml-aff-label-sup added-by-sys\>2</sup> 中国林业科学研究院经济林研究所, 河南 郑州 450003,<sup class=\mag-xml-aff-label-sup added-by-sys\>3</sup> 安阳工学院生物与食品工程学院, 河南 安阳 455099

关键词：‘冬枣’,果实,原生质体,酶解法,酶解液

基金：国家重点研发计划(2024YFD2200600),河南省科技攻关项目(252102111161)

【目的】建立高效的‘冬枣’(Ziziphus jujuba ‘Dongzao’)果实原生质体分离技术体系,系统分析不同因素对‘冬枣’果实原生质体提取的影响,为后续基因功能研究及果实发育机制解析提供技术支撑。【方法】采用半红期‘冬枣’果实为试验材料,以65 mmol/L 氯化钙(CaCl2)、10 mmol/L 2-吗啉乙磺酸(MES)、1 mmol/L 二硫苏糖醇(DTT)混合溶液(pH为5.8)为基础,通过分析不同质量浓度酶液(纤维素酶、离析酶、果胶酶)、氯化钾浓度(150、205、255、305、355、405、430、455、505 mmol/L)、酶解时间(2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 h)、真空(200 Pa)处理时间(10、20、30 min)4个条件组合,经过多因素试验筛选出纤维素酶、果胶酶、离析酶、氯化钾的最适浓度,最后确定分离‘冬枣’果实原生质体的最优酶解方案。【结果】以酶解液为0.02 g/mL纤维素酶、0.01 g/mL果胶酶、0.01 g/mL离析酶、430 mmol/L氯化钾(KCl),采用200 Pa真空处理20 min,于水平摇床上30 r/min避光酶解3.0 h,原生质体产量可达1.82&#x000D7;106个/mL,且原生质体细胞形态完整、活性最佳。【结论】通过对酶浓度、酶解时间、氯化钾浓度、真空处理时间4个酶解影响因素的筛选,得到可以提取出细胞形态饱满、活力较高的原生质体的酶解液组合,建立了高效的‘冬枣’果实原生质体分离技术体系,为后续‘冬枣’基因功能验证及果实发育的分子机制研究提供技术支持。

来源：2026年第2期

《南京林业大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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